RFLP وتطبيقات تحليل الحمض النووي

تعدُّد تعدد أشكال طول القطع (RFLP) هو طريقة جزيئية للتحليل الجيني تسمح بتحديد الأفراد بناءً على أنماط فريدة من انزيم التقييد قطع في مناطق محددة من الحمض النووي.

يشار إليه أيضًا باسم تحليل RFLP ، تستفيد التقنية من تعدد الأشكال في الرموز الوراثية للأفراد. على الرغم من أن جميع أعضاء الأنواع لديهم بشكل أساسي نفس التركيب الجيني ، فإن هذه الاختلافات الطفيفة مسؤولة عن الاختلافات في النمط الظاهري ، مثل المظهر أو التمثيل الغذائي ، بين الأفراد.

تتضمن تقنية تحليل RFLP قطع منطقة معينة من الحمض النووي مع تقلبات معروفة ، مع إنزيمات التقييد ، ثم فصل أجزاء الحمض النووي عن طريق الرحلان الكهربائي للهلام agarose وتحديد عدد الأجزاء والأحجام النسبية.

إنزيم التقييد هو إنزيم ، جزيء بروتيني ، يقطع الحمض النووي في مواقع التقييد. في الأساس ، يتم تفكيك عينة الحمض النووي وهضمها بواسطة إنزيمات التقييد. يتم فصل الأجزاء الناتجة وفقًا لأطوالها ، ويختلف نمط أحجام الأجزاء لكل فرد تم اختباره.

تتطلب عملية RFLP الكاملة وضع علامات على المسبار ، وتجزئة الحمض النووي ، والرحلان الكهربائي ، والنشاف ، والتهجين ، والغسيل ، والتصوير الذاتي. يتم تصور RFLP المكتشف باستخدام فيلم الأشعة السينية في التصوير الشعاعي الذاتي ، حيث يمكن عرض وتحليل أجزاء DNA بعد فصلها عن بعضها بواسطة الرحلان الكهربائي.

تتضمن بعض تطبيقات تحليل RFLP ما يلي:

• بصمة الحمض النووي: قد يستخدم علماء الطب الشرعي تحليل RFLP لتحديد المشتبه بهم بناءً على عينات الأدلة التي تم جمعها في مشاهد الجرائم.
• أبوة: يستخدم RFLP أيضًا في تحديد الأبوة أو لتتبع النسب.
• التنوع الجيني: يمكن استخدام هذه التقنية في دراسة تطور وهجرة الحياة البرية ، ودراسة أنماط التكاثر في مجموعات الحيوانات واكتشاف وتشخيص بعض الأمراض.

تعد تقنية استخدام اكتشاف RFLP للاختلافات في الجينومات أداة حيوية في رسم خرائط الجينوم وتحليل الأمراض الوراثية. إذا تم البحث عن موقع جين مرض معين في كروموسوم معين ، فإن الباحثين سيبحثون تحليل الحمض النووي لأفراد الأسرة المصابين بالمرض ، ثم ابحث عن أنماط مماثلة من الميراث في RFLP الأليلات.

بمجرد أن يتم توطين الجين المرضي ، فإن إجراء تحليل RFLP على أفراد الأسرة الآخرين يمكن أن يكشف عن حامل الجينات الطافرة أو يشير إلى خطر المرض العام. من المهم أن نلاحظ أن تقنية RFLP لا تستخدم على نطاق واسع الآن حيث يتم استخدام تقنيات أحدث وأكثر قوة لتحليل الحمض النووي في علم الطب الشرعي والعديد من المجالات الأخرى.

لسوء الحظ ، فإن تقنية تحليل RFLP مملة وبطيئة. بصرف النظر عن طلب كمية كبيرة من عينة الحمض النووي - تحتاج العينة عادة إلى أن تكون بحجم ربع ، وهو كبيرة نسبيًا لعينات الحمض النووي - يمكن أن تستغرق العملية ، بدءًا من وضع العلامات على المجس إلى الغسيل والتصوير الذاتي ، ما يصل إلى شهر كامل اكتمال.

استبدلت نتائج مشروع الجينوم البشري إلى حد كبير الحاجة إلى RFLP. سمح المشروع بتحديد التسلسل الكامل للحمض النووي الموجود في الخلايا البشرية ، والجينوم البشري ، وتحديد جميع الجينات في الجينوم البشري.