برنامج تلفزيوني أو مخزنة بالفوسفات المالحة حل عازلة وهي ذات قيمة خاصة لأنها تحاكي تركيز أيون ، الأسمولية ، ودرجة الحموضة في سوائل جسم الإنسان. بمعنى آخر ، إنه متساوي التوتر بالنسبة للحلول البشرية ، لذلك من غير المحتمل أن يتسبب في تلف الخلايا أو السمية أو هطول الأمطار غير المرغوب فيه في الأبحاث البيولوجية أو الطبية أو الكيمياء الحيوية.
التركيب الكيميائي PBS
هناك العديد من الوصفات لإعداد حل برنامج تلفزيوني. يحتوي المحلول الأساسي على الماء وفوسفات الهيدروجين والصوديوم كلوريد الصوديوم. تحتوي بعض المستحضرات على كلوريد البوتاسيوم وفوسفات هيدروجين البوتاسيوم. يمكن أيضًا إضافة EDTA في التحضير الخلوي لمنع التكتل.
المالحة المخزنة بالفوسفات ليست مثالية للاستخدام في الحلول التي تحتوي على الكاتيونات ثنائية التكافؤ (Fe2+زن2+) لأن هطول الأمطار قد يحدث. ومع ذلك ، تحتوي بعض حلول PBS على الكالسيوم أو المغنيسيوم. ضع في اعتبارك أيضًا أن الفوسفات قد يمنع التفاعلات الإنزيمية. كن على دراية خاصة بهذا العيب المحتمل عند العمل مع الحمض النووي. في حين أن PBS ممتاز للعلم الفسيولوجي ، فكن على دراية بأن الفوسفات في عينة مخزنة من PBS قد تترسب إذا تم خلط العينة مع الإيثانول.
تركيبة كيميائية نموذجية من 1X PBS لها تركيز نهائي يبلغ 10 ملي مولار43−و 137 ملم NaCl و 2.7 ملم KCl. إليك التركيز النهائي للكاشفات في المحلول:
| ملح | تركيز (مليمول / لتر) | التركيز (جم / لتر) |
|---|---|---|
| كلوريد الصوديوم | 137 | 8.0 |
| KCl | 2.7 | 0.2 |
| نا2HPO4 | 10 | 1.42 |
| KH2ص4 | 1.8 | 0.24 |
بروتوكول عمل محلول ملحي مخزون من الفوسفات
اعتمادًا على الغرض الخاص بك ، يمكنك إعداد 1X أو 5X أو 10x برنامج تلفزيوني. كثير من الناس ببساطة شراء أقراص عازلة PBS ، وحلها في الماء المقطر ، وضبط درجة الحموضة حسب الحاجة مع حمض الهيدروكلوريك أو هيدروكسيد الصوديوم. ومع ذلك ، من السهل عمل الحل من البداية. فيما يلي وصفات لمحلول ملحي مخزون من الفوسفات 1X و 10x:
كاشف |
كمية لإضافة (1 ×) |
التركيز النهائي (1 ×) |
المبلغ المطلوب إضافته (10 ×) |
التركيز النهائي (10 ×) |
| كلوريد الصوديوم | 8 غ |
137 ملم | 80 جرام |
1.37 م |
| KCl | 0.2 غ |
2.7 ملم | 2 غ |
27 ملم |
| Na2HPO4 | 1.44 غ |
10 ملم | 14.4 جرام |
100 ملم |
| KH2PO4 | 0.24 غ |
1.8 ملم | 2.4 جرام |
18 ملم |
اختياري: | ||||
| CaCl2 • 2H2O | 0.133 جرام |
1 ملم | 1.33 غ |
10 ملم |
MgCl2 • 6H2O |
0.10 غ | 0.5 ملم |
1.0 غ | 5 ملم |
- حل الأملاح الكاشف في 800 مل ماء مقطر.
- ضبط درجة الحموضة إلى المستوى المطلوب مع حمض الهيدروكلوريك. عادة ما يكون هذا 7.4 أو 7.2. استخدم مقياس الأس الهيدروجيني لقياس الأس الهيدروجيني ، وليس ورق الأس الهيدروجيني أو أي تقنية أخرى غير دقيقة.
- أضف الماء المقطر لتحقيق حجم نهائي 1 لتر.
تعقيم وتخزين محلول PBS
التعقيم ليس ضروريًا لبعض التطبيقات ، ولكن إذا كنت تقوم بتعقيمه ، فقم بتوزيع المحلول في قسامات والأوتوكلاف لمدة 20 دقيقة عند 15 رطل / بوصة مربعة (1.05 كجم / سم2) أو استخدم تعقيم المرشح.
قد يكون المالح المخزن بالفوسفات تخزينها في درجة حرارة الغرفة. قد يتم تبريده أيضًا ، ولكن قد يكون محلول 5X و 10X يترسب عندما يبرد. إذا كان يجب عليك تبريد محلول مركز ، قم أولاً بتخزينه في درجة حرارة الغرفة حتى تتأكد من أن الأملاح قد ذابت تمامًا. إذا حدث هطول الأمطار ، فإن تسخين درجة الحرارة سيعيدها إلى المحلول. مدة صلاحية المحلول المبرد شهر واحد.
تمييع محلول 10x لعمل 1X PBS
10X هو محلول مركز أو مخزون ، يمكن تخفيفه لصنع 1X أو محلول عادي. يجب تخفيف محلول 5X 5 مرات لجعل التخفيف العادي ، بينما يجب تخفيف محلول 10X 10 مرات.
لتحضير محلول عمل سعة 1 لتر من 1X PBS من محلول 10x PBS ، أضف 100 مل من محلول 10x إلى 900 مل من الماء. هذا يغير فقط تركيز المحلول ، وليس غرام أو كمية مولية من الكواشف. يجب ألا يتأثر الأس الهيدروجيني.
PBS مقابل DPBS
محلول عازل شائع آخر هو محلول ملحي مخفف من الفوسفات في Dulbecco أو DPBS. يستخدم DPBS ، مثل PBS ، للبحوث البيولوجية والمخازن في نطاق 7.2 إلى 7.6 درجة الحموضة. يمكن تخزينه في درجة حرارة الغرفة. يحتوي محلول دولبيكو على تركيز أقل من الفوسفات. يبلغ 8.1 ملي مولار من أيونات الفوسفات ، في حين أن PBS العادي هو 10 ملي مولار فوسفات. وصفة 1x DPBS هي:
| كاشف | المبلغ المراد إضافته (1x) |
| كلوريد الصوديوم | 8.007 جرام |
| KCl | 0.201 غ |
| نا2HPO4 | 1.150 غ |
| KH2ص4 | 0.200 غ |
| اختياري: | |
| CaCl2• 2H2يا | 0.133 جرام |
| MgCl2• 6 ساعات2يا | 0.102 جرام |
حل الأملاح في 800 مل من الماء. اضبط درجة الحموضة إلى 7.2 إلى 76 باستخدام حمض الهيدروكلوريك. اضبط الحجم النهائي على 1000 مل بالماء. الأوتوكلاف عند 121 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة.
المصادر
- دولبيكو ، ر. وآخرون. (1954). "تشكيل اللويحات وعزل الخطوط النقية مع فيروسات شلل الأطفال". ج. إكسب. ميد. 99 (2): 167–182.
- "محلول ملحي مخزون من الفوسفات (PBS") بروتوكولات Spring Spring Harbour (2006). معمل مختبر كولد سبرينج.