محلول ملحي فوسفات (PBS) هو محلول منظم يستخدم عادة لتلطيخ المناعية (IHC) وغالبًا ما يستخدم في البحث البيولوجي. PBS هو محلول ملحي مائي يحتوي على فوسفات هيدروجين الصوديوم ، وكلوريد الصوديوم ، وفي بعض الحالات ، كلوريد البوتاسيوم وفوسفات هيدروجين البوتاسيوم.
تلطيخ المناعية
تشير الكيمياء المناعية إلى عملية الكشف عن المستضدات مثل البروتينات في خلايا أ قسم الأنسجة باستخدام مبدأ الأجسام المضادة ملزمة خصيصا للمستضدات في البيولوجية مناديل. كان تلطيخ المناعي أول طريقة تلطيخ المناعية الكيميائية.
تصبح المستضدات مرئية عند الاقتران بالأجسام المضادة باستخدام أصباغ مضان بسبب تفاعل ربط الجسم المضاد - الضد. تحدث هذه العملية عندما يتم تنشيطها بواسطة ضوء مثير لطول موجة محدد تحت مجهر الفلورسنت.
تتطابق تركيزات الأسمدة والأيونات للحلول مع تركيزات الجسم البشري - فهي متساوية التوتر.
وصفة ل PBS العازلة
يمكنك إعداد برنامج تلفزيوني بعدة طرق. هناك صيغ متعددة. بعضها لا يحتوي على البوتاسيوم ، والبعض الآخر يحتوي على الكالسيوم أو المغنيسيوم.
هذه الوصفة سهلة نسبيًا. انها حل الأسهم PBS 10x (0.1M). ومع ذلك ، يمكنك أيضًا عمل حل لمخزون 1X ، أو البدء بهذه الوصفة 10x وتخفيفها إلى 1X. تستغرق العملية بأكملها حوالي 10 دقائق ويتم أيضًا توفير خيار لإضافة Tween.
ما ستحتاجه لجعل PBS Buffer
- monobasic فوسفات الصوديوم (اللامائية)
- ثنائي فوسفات الصوديوم (لا مائي)
- كلوريد الصوديوم
- تحجيم ووزن القوارب
- تقليب مغناطيسي وقضيب التحريك
- مسبار الأس الهيدروجيني الذي يتم معايرته والحلول المناسبة لضبط الأس الهيدروجيني
- قارورة حجمية 1 لتر
- Tween 20 (اختياري)
كيفية جعل عازلة PBS
- تزن 10.9 جم من ثنائي فوسفات الصوديوم اللامائي (Na2HPO4) ، و 3.2 جرام من فوسفات الصوديوم اللامائية (NaH2PO4) ، و 90 جم من كلوريد الصوديوم (NaCl). تذوب في أقل من 1 لتر من الماء المقطر.
- اضبط درجة الحموضة إلى 7.4 واجعل المحلول يصل إلى الحجم النهائي 1 لتر.
- خفف 10x قبل الاستخدام وقم بإعادة ضبط درجة الحموضة إذا لزم الأمر.
- يمكنك عمل محلول PBS يحتوي على 0.5 بالمائة Tween 20 بإضافة 5mL Tween 20 إلى محلول 1L.
نصائح لصنع عازلة PBS
قم بتخزين المخزن المؤقت في درجة حرارة الغرفة بعد عمل محلول PBS.
يمكن استبدال الكواشف غير اللامائية ولكن سيتعين عليك إعادة حساب الكتلة المناسبة لكل منها لاستيعاب جزيئات الماء المضافة.
استخدامات PBS Buffer
يستخدم المالح المخزن بالفوسفات العديد من الاستخدامات لأنه متساوي التوتر وغير سام لمعظم الخلايا. يمكن استخدامه لتخفيف المواد وغالبًا ما يُستخدم لشطف حاويات الخلايا. يمكن استخدام PBS كمخفف في طرق مختلفة لتجفيف الجزيئات الحيوية لأن جزيئات الماء الموجودة داخلها ستتمحور حول المادة - البروتين ، على سبيل المثال. سيتم "تجفيفه" وتثبيته على سطح صلب.
يبقى الرقم الهيدروجيني ثابتًا ومتسقًا لمنع تدمير الخلايا.
الطبقة الرقيقة من الماء التي ترتبط بالمواد تمنع تمسخ أو تغيرات مطابقة أخرى. يمكن استخدام مخازن الكربونات لنفس الغرض ولكن مع فعالية أقل.
يمكن استخدام برنامج تلفزيوني أيضا لاتخاذ طيف مرجعي عند قياس بروتين الامتزاز في قياس الاهليلجيه.