10 × TBE العازلة بروتوكول أو وصفة

click fraud protection

TBE و TAE تستخدم كمخازن في علم الأحياء الجزيئي ، في المقام الأول الكهربائي من الأحماض النووية. تستخدم مخازن تريس تحت ظروف الأس الهيدروجيني الأساسية قليلاً ، كما هو الحال بالنسبة للرحلان الكهربائي للحمض النووي ، لأن هذا يحافظ على الحمض النووي قابل للذوبان في المحلول وإزالته حتى ينجذب إلى القطب الموجب وينتقل من خلال جل. EDTA هو مكون في الحل لأن هذا شائع عامل خالب يحمي الأحماض النووية من التحلل بواسطة الإنزيمات. يخلب EDTA الكاتيونات ثنائية التكافؤ التي هي عوامل مساعدة للنوكلياز التي قد تلوث العينة. ومع ذلك ، نظرًا لأن كاتيون المغنيسيوم هو عامل مساعد لبوليميراز الحمض النووي وإنزيمات التقييد ، يتم الاحتفاظ بتركيز EDTA منخفضًا عن قصد (حوالي 1 ملم من التركيز).

لا تحتاج لتعقيم الحل. على الرغم من أن هطول الأمطار قد يحدث بعد فترة زمنية ، إلا أن محلول المخزون لا يزال قابلاً للاستخدام. يمكنك تعديل الأس الهيدروجيني باستخدام مقياس الأس الهيدروجيني وإضافة منسدلة بالتركيز حمض الهيدروكلوريك (HCl). لا بأس بتخزين المنطقة العازلة TBE في درجة حرارة الغرفة ، على الرغم من أنك قد ترغب في تصفية محلول المخزون من خلال مرشح 0.22 ميكرون لإزالة الجسيمات التي من شأنها تعزيز هطول الأمطار.

instagram viewer

سيعطيك استخدام حل المخزون 5X أو 10X عن طريق الصدفة نتائج سيئة لأنه سيتم توليد الكثير من الحرارة. بالإضافة إلى إعطائك دقة ضعيفة ، قد تتلف العينة.

على الرغم من أن TBE و TAE هما عازلان كهربائيان شائعان ، إلا أن هناك خيارات أخرى للحلول الموصلة منخفضة المولية ، بما في ذلك عازلة بورات الليثيوم وعازلة بورات الصوديوم. المشكلة مع TBE و TAE هي أن المخازن المؤقتة القائمة على Tris تحد من المجال الكهربائي الذي يمكن استخدامه في الرحلان الكهربائي لأن الشحن الزائد يسبب درجة حرارة هاربة.

instagram story viewer