TAE buffer عبارة عن محلول يتكون من قاعدة Tris وحمض الخليك و EDTA (Tris-acetate-EDTA). تاريخيا هو العازلة الأكثر شيوعا المستخدمة لهلام الاغاروز الكهربائي في تحليلات منتجات الحمض النووي الناتجة عن PCR تضخيم الحمض النووي بروتوكولات التنقية أو استنساخ الحمض النووي التجارب.
يحتوي هذا المخزن المؤقت على قوة أيونية منخفضة وقدرة تخزين منخفضة. هو الأنسب إلى الرحلان الكهربائي للقطع الكبيرة (> 20 كيلوباس) من الحمض النووي وسيحتاج إلى استبداله بشكل متكرر أو إعادة تدويره لمدة أطول (> 4 ساعات) من تشغيل الجل. مع وضع ذلك في الاعتبار ، قد ترغب في التفكير في عمل عدة دفعات من المخزن المؤقت.
نظرًا لسهولة إنشاء المخزن المؤقت ويمكن تنفيذ الخطوات بسرعة ، فإن جعل أكثر من دفعة واحدة في كل مرة لا يجب أن يستغرق وقتًا طويلاً أو صعبًا. باستخدام الإرشادات أدناه ، يجب أن يستغرق الأمر 30 دقيقة فقط لإنشاء المخزن المؤقت TAE.
ما تحتاجه ل TAE Buffer
نظرًا لأن إنشاء المخزن المؤقت TAE يتطلب فقط مجموعة سريعة وبسيطة من التعليمات ، فإن عدد المواد اللازمة لذلك ليس مفرطًا. ستحتاج فقط ملح EDTA (حمض إيثيلين ثنائي أمين الخليك) ملح ثنائي الصوديوم ، وقاعدة تريس ، وحمض الخليك الجليدي.
يتطلب إنشاء المخزن المؤقت أيضًا مقياس الأس الهيدروجيني ومعايير المعايرة ، حسب الاقتضاء. ستحتاج أيضًا إلى 600 مللتر و 1500 ملل من الأكواب أو القوارير بالإضافة إلى أسطوانات مدرجة. أخيرًا ، ستحتاج إلى ماء منزوع الأيونات وقضبان التقليب وألواح التقليب.
في التعليمات التالية ، يتم اختزال وزن الصيغة (يتم ضرب الكتلة الذرية لكل عنصر في عدد الذرات ، ثم يتم جمع كتلة كل منها معًا) في شكل مهاجم.
إعداد حل الأسهم EDTA
يتم إعداد حل EDTA مسبقًا. لن يدخل EDTA في الحل تمامًا حتى يتم تعديل الأس الهيدروجيني إلى حوالي 8.0. لمخزون 500 مل محلول 0.5 م (مولارية ، أو تركيز) EDTA ، يزن 93.05 جرامًا من ملح ثنائي EDTA (FW = 372.2). قم بإذابته في 400 مل من الماء منزوع الأيونات واضبط درجة الحموضة مع هيدروكسيد الصوديوم (NaOH). قم بتعبئة الحل بحجم نهائي يبلغ 500 مل.
إنشاء حل الأسهم الخاصة بك
اصنع محلولًا مركّزًا (50x) من TAE من خلال وزن 242 جرامًا من قاعدة Tris (FW = 121.14) وإذابته في حوالي 750 مل من الماء منزوع الأيونات. أضف بعناية 57.1 ملليلتر من حمض الجليدية و 100 ملليلتر من 0.5 M EDTA (الرقم الهيدروجيني 8.0).
بعد ذلك ، اضبط الحل على حجم نهائي 1 لتر. يمكن تخزين محلول المخزون هذا في درجة حرارة الغرفة. لم يتم تعديل الرقم الهيدروجيني لهذا المخزن المؤقت ويجب أن يكون حوالي 8.5.
إعداد حل عمل من TAE Buffer
يتم حل محلول المخزن المؤقت 1x TAE ببساطة عن طريق تخفيف محلول المخزون بمقدار 50x في الماء منزوع الأيونات. تركيزات المذاب النهائية هي 40 ملي مولار (مليمول) خلات تريس و 1 ملي EDTA. المخزن المؤقت جاهز الآن للاستخدام في تشغيل جل الاغاروز.
تغليف
تحقق من المخزون قبل البدء للتأكد من أن لديك جميع المواد المذكورة أعلاه لمخزن TAE المؤقت. يجب أن يكون موظفو التوريد قادرين على إخبارك إذا كان لديهم جميع العناصر التي تحتاجها في المخزون. لا تريد أن ينتهي بك الأمر إلى فقدان شيء في منتصف الإجراء.