يسمح خط ثقافة البكتيرية البكتيريا للتكاثر على وسط ثقافة في بيئة خاضعة للرقابة. تتضمن العملية الانتشار بكتيريا عبر طبق أجار والسماح لهم بالاحتضان عند درجة حرارة معينة لفترة من الزمن. يمكن استخدام الخطوط البكتيرية لتحديد وعزل المستعمرات البكتيرية النقية من مجموعة سكانية مختلطة. يستخدم علماء الأحياء الدقيقة طرق تسليط الضوء على الثقافة البكتيرية وغيرها من الميكروبات لتحديد الكائنات الحية الدقيقة وتشخيص العدوى.
عندما تنمو مستعمرات بكتيرية ، سوف تتعامل مع الملايين منها بكتيريا. من المهم أن تتبع كل شيء قواعد سلامة المختبر. يجب اتخاذ الاحتياطات اللازمة لضمان عدم استنشاق الجراثيم أو ابتلاعها أو السماح لها بلمس جلدك. يجب أن تبقى الألواح البكتيرية مغلقة ومثبتة بشريط أثناء الحضانة. يجب التخلص من أي صفائح بكتيرية غير مرغوب فيها بشكل صحيح عن طريق وضعها في جهاز التعقيم لقتل البكتيريا قبل التخلص منها. كما يمكن سكب المبيض المنزلي على المستعمرات البكتيرية لتدميرها.