العازل TBE (Tris-borate-EDTA) هو محلول عازل يتكون من قاعدة Tris وحمض البوريك و EDTA (حمض إيثيل ثنائي أمين أمين التتراسيك). غالبًا ما يتم استخدام هذا المخزن المؤقت في الرحلان الكهربائي للهلام في تحليل منتجات DNA التي تنتج عن تضخيم PCR أو بروتوكولات تنقية DNA أو تجارب استنساخ DNA.
يستخدم TBE
العازلة TBE مفيدة بشكل خاص لفصل شظايا DNA أصغر (MW <1000) ، مثل المنتجات الصغيرة انزيم التقييد الهضم. TBE لديه سعة تخزينية أكبر وسيعطي دقة أوضح من TAE buffer. العازلة TAE (Tris-acetate-EDTA) عبارة عن محلول يتكون من قاعدة Tris وحمض الخليك و EDTA.
TBE عادة ما يكون أكثر تكلفة من TAE ويمنع غزو الدنا ، والذي قد يسبب مشاكل إذا كانت الخطوات التالية لتنقية الحمض النووي والربط مرتبطة به. من خلال الخطوات الثلاث البسيطة التالية ، تعلم كيفية جعل TBE عازلة. لا ينبغي أن يستغرق إنشاء أكثر من 30 دقيقة تقريبًا.
ماذا تحتاج
لجعل TBE عازلة ، ستحتاج فقط أربع مواد. العناصر المتبقية في هذه القائمة هي المعدات. المواد الأربعة المطلوبة هي EDTA ملح الصوديوم ، قاعدة تريس ، حمض البوريك والماء منزوع الأيونات.
بالنسبة للمعدات ، ستحتاج إلى مقياس الأس الهيدروجيني ومقاييس المعايرة ، حسب الاقتضاء. بالإضافة إلى ذلك ، ستحتاج إلى بعض الأكواب أو القوارير التي تبلغ قوامها 600 ملليمترا و 1500 ملليتر. إن تدوير احتياجاتك من المعدات عبارة عن أسطوانات متدرجة وقضبان ضجة وألواح ضجة.
تحقق من المخزون في المختبر الذي ستستخدمه للتأكد من أن لديك كل ما تحتاجه قبل أن تبدأ. ليس هناك ما هو أسوأ من الاضطرار إلى التوقف في منتصف إعداد الحل لأنك نفدت المواد المناسبة.
إذا كان مختبرك موجودًا في المدرسة أو في موقع عملك ، فتحقق من الموظفين المناسبين لمعرفة أن لديهم جميع العناصر الموجودة في المخزون. القيام بذلك قد يوفر لك الوقت والطاقة في النهاية.
يتم اختصار وزن الصيغة كـ FW. هو الوزن الذري لعنصر مضروب في عدد ذرات كل عنصر في صيغة ما ، ثم يضيف كل كتل كل عنصر معًا.
الأسهم الحل من EDTA
يجب إعداد حل EDTA مسبقًا. لن يدخل EDTA بشكل كامل إلى الحل حتى يتم ضبط الرقم الهيدروجيني إلى حوالي 8.0. للحصول على محلول سعة 500 مللي لتر من 0.5 M EDTA ، تزن 93.05 جرامًا من ملح الصوديوم EDTA (FW = 372.2). ثم قم بحلها في 400 ملليلتر من الماء منزوع الأيونات وضبط درجة الحموضة مع هيدروكسيد الصوديوم (هيدروكسيد الصوديوم). بعد ذلك ، قم بتعبئة الحل للوصول إلى الحجم النهائي البالغ 500 ملليلتر.
محلول المخزون من TBE
اصنع محلولًا مركَّزًا (5 ×) من TBE بوزن 54 جرامًا من قاعدة Tris (FW = 121.14) و 27.5 غرام من حمض البوريك (مهاجم = 61.83) ويذوب في حوالي 900 ملليلتر من منزوع الأيونات ماء. ثم أضف 20 ملليلتر من 0.5 م (مولي ، أو التركيز) EDTA (الرقم الهيدروجيني 8.0) وضبط الحل إلى الحجم النهائي من 1 لتر. يمكن تخزين هذا المحلول في درجة حرارة الغرفة ولكن تتشكل المادة المترسبة في المحاليل القديمة. قم بتخزين المخزن المؤقت في زجاجات زجاجية وتجاهلها إذا تشكل المرسب.
حل العمل من TBE
لالكهربائي هلام agarose ، يمكن استخدام العازلة TBE بتركيز 0.5x (01:10 التخفيف من الأسهم المركزة). تمييع الحل الأسهم بنسبة 10x في الماء منزوع الأيونات. تركيزات المذاب النهائي هي 45 ملم تريس بورات و 1 ملم (ملي مليمتر) EDTA. المخزن المؤقت جاهز الآن للاستخدام في تشغيل هلام الاغاروز.